Fertilizer Control fifth amendment

रजिस्ट्री स.ं डी.एल.- 33004/99 REGD. No. D. L.-33004/99 xxxGIDHxxx सी.जी.-डी.एलxx.x-GअID.-E0x2xx0 72021-228076 CG-DL-E-02072021-228076 ऄसाधारण EXTRAORDINARY भाग II—खण् ड 3—ईप-खण्ड (ii) PART II—Section 3—Sub-section (ii) प्राजधकार स ेप्रकाजित PUBLISHED BY AUTHORITY स.ं 2473] नइ कदल्ली, िुक्रिार, िुलाइ 2, 2021/अिाढ़ 11, 1943 No. 2473] NEW DELHI, FRIDAY, JULY 2, 2021/ASHADHA 11, 1943 कृजि और ककसान कल्याण मत्रं ालय (कृजि, सहकाररता और ककसान कल्याण जिभाग) अदिे नइ कदल्ली, 1 िुलाइ, 2021 का.अ.2671(ऄ).—केन्द्रीय सरकार, अिश्यक िस्ट्तु ऄजधजनयम, 1955 (1955 का 10) की धारा 3 द्वारा प्रदत्त िजियों का प्रयोग करते हुए, ईिवरक (ऄकाबवजनक, काबवजनक या जमजित) (जनयंत्रण) अदिे 1985 का और संिोधन के जलए जनम्नजलजखत अदिे करती है, ऄथावत् :- 1. (1) आस अदिे का संजिप्त नाम ईिवरक (ऄकाबवजनक, काबवजनक या जमजित) (जनयंत्रण) पांचिां संिोधन अदिे 2021 ह ै। (2) ये रािपत्र में ईनके प्रकािन की तारीख से प्रिृत्त होंगे । 2. ईिवरक (ऄकाबवजनक, काबवजनक या जमजित) (जनयंत्रण) अदिे 1985, (जिसे आसमें आसके पश्चात ईि अदेि कहॉं गया है) मे :- (i) खंड (2) में, ईपखंड (ढ़ढ़क) में “(िैसे ऄरंडी या नीम) कोष्ठको और िब्दो के स्ट्थान पर” जिसमे ऄरंडी, नीम, कंरि (पांगामीजपनाटा) महुअ (मधुकालेजगफोजलया) िटरोफा िाजमल ह ैको रखा िाएगा । (ii) खंड 30 में, ईपखंड (2) के स्ट्थान पर जनम्नजलजखत को रखा िाएगा, ऄथावत्:- “(2) प्रयोग िाला नमूने का जिश्लेिण करेगी और जनम्नजलजखत ररजत से ईपखंड (1) में जनर्ददष्ट ज्ञापन में जिजनर्ददष्ट प्राजधकारी को जनम्नजलजखत ररजत से जिश्लेिण ररपोटव भेिेगी, ऄथावत:्- (क) ईिवरक की दिा में, िैि ईिवरक, काबवजनक ईिवरक और ऄखाद्य योग्य तेल रजहत खली ईिवरक के जसिाय जिश्लेिण ररपोटव प्ररूप ठ में होगी और पन्द्रह कदनो के भीतर भेिी िाएगी; (ख) काबवजनक ईिवरक के नमूने की दिा में जिश्लेिण ररपोटव प्ररूप ठ1 में होगी और तीस कदनो के भीतर भेिी िाएगी; (ग) िैि ईिवरक की दिा में जिश्लेिण ररपोटव प्ररूप ठ2 में होगी और पैतालीस कदनो के भीतर भेिी िाएगी; 3669 GI/2021 (1)2 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] (घ) ऄखाद्य योग्य तेल रजहत खली ईिवरक की दिा में जिश्लेिण ररपोटव प्ररूप ठ3 में होगी और प्रयोगिाला में नमूने की प्राजप्त की तारीख से तीस कदनो के भीतर भेिी िाएगी ।”; (iii) ऄनुसूची III में – (क) “[खंड (ि) और खंड (थ) देखें]” कोष्ठको, िब्दो, ऄंको और ऄिरो के स्ट्थान पर “[खंड (थ) दखे े] कोष्ठक, िब्द ऄंक और ऄिर रखे िाएंग;े (ख) भाग क और भाग ख और ईससे संबंजधत प्रजिजष्टया के स्ट्थान पर जनम्नजलजखत भाग और प्रजिजष्टया रखी िाएगी, ऄथावत:्- “भाग क िैि ईिवरको का जिजनदिे 1. राआिोजबयम कुल व्यिहायव संख्या सी एफ यू चूणव दानेदार या िाहक सामग्री का न्द्यूनतम 5x107 कोजिका प्रजत ग्राम/या कैप्स ूल मात्रा अधाररत जिलेरटन प्रजत ग्राम ऄथिा तरल का 1x108 कोजिका प्रजत जम.ली. । संदिू ण स्ट्तर 105 तनुकरण पर कोइ संदिू ण नही पी एच 6.5 - 7.5 िमता जििेिता पेकेट पर सूचीबध्द सभी प्रिाजतयो पर प्रभािी नोडूलेिन कदखना चाजहए और िब जनयंजत्रत पररजस्ट्थजतयों के ऄधीन दी गइ रीजत के ऄनुसार परीिण ककया िाए, 25 कदनों की बुिाइ के पश्चात् परीिण पौधें में िुष् क पदाथव में कम से कम 25 प्रजतित िृजि होनी चाजहए । 2. एिोटोबैक् टर कुल व्यिहायव संख्या सी एफ यू चूणव दानेदार या िाहक सामग्री का न्द्यूनतम 5x107 कोजिका प्रजत ग्राम/या कैप्स ूल मात्रा अधाररत जिलेरटन प्रजत ग्राम ऄथिा तरल का 1x108 कोजिका प्रजत जम.ली. । संदिू ण स्ट्तर 105 तनुकरण पर कोइ संदिू ण नही पी एच 6.5 - 7.5 िमता जििेिता ककस्ट्म में ईपयोग ककए गए प्राजत ग्राम सुक्रोि मे कम से कम 10 जम.ग्रा. नाआरोिन के जनधावरण की िमता होनी चाजहए । 3. एिोसजपररलम कुल व्यिहायव संख्या सी एफ यू चूणव दानेदार या िाहक सामग्री का न्द्यूनतम 5x107 कोजिका प्रजत ग्राम/या कैम्सूल मात्रा अधाररत जिलेरटन प्रजत ग्राम ऄथिा तरल का 1x108 कोजिका प्रजत जम.ली. । संदिू ण स्ट्तर 105 तनुकरण पर कोइ संदिू ण नही पी एच 6.5 - 7.5 िमता जििेिता नाआरोिन मुि ऄधव ठोस ब्रोमोथआमोल नीले माध्यम मे सफेद जिल्ली का बनना । 4. फास्ट्फेट घुलनिील बैक्टीररया कुल व्यिहायव संख्या सी एफ यू चूणव दानेदार या िाहक सामग्री का न्द्यूनतम 5x107 कोजिका प्रजत ग्राम या तरल का 1x108 कोजिका प्रजत जम.ली.। संदिू ण स्ट्तर 105 तनुकरण पर कोइ संदिू ण नही पी एच 6.5 - 7.5 नम/िुष्क चूणव दानेदार िाहक अधाररत और 5.0 - 7.5 तरल अधाररत के जलए । िमता जििेिता िब फास्ट्फेट स्रोत के रूप मे राआकैजल्ियम फास्ट्फेट या एल्यूजमजनयम फॉस्ट्फेट या अयरन फास्ट्फेट का प्रयोग करते हुए दी गइ रीजत के ऄनुसार परीिण ककया गया हो तब ककस्ट्म मे तरल यूि फास्ट्फोरस की कम से कम 30 जम ग्रा/ली. धुलनिील िमता होनी चाजहए ।[भाग II—खण् ड 3(ii)] भारत का रािपत्र : ऄसाधारण 3 5. माआकोररिल िैि ईिवरक ईत्पाद के कुल व्यिहायव बीिाणु/प्रजत ग्राम तैयार ईत्पाद का न्द्यूनतम 10 व्यिहायव बीिाणु प्रजत ग्राम पी एच 6.0 -7.5 आनोकुलम िमता 10 िलि तनुकरण सजहत एम.पी एन की रीजत द्वारा तैयार ईत्पाद की 1200 आनोकुलम िमता प्रजत ग्राम 6. पोटैजियम मोजबलाआजिग िैि ईिवरक (के एम बी) कुल व्यिहायव संख्या सी एफ यू चूणव दानेदार या िाहक सामग्री का न्द्यूनतम 5x107 कोजिका प्रजत ग्राम/या कैप्स ूल मात्रा अधाररत जिलेरटन प्रजत ग्राम ऄथिा तरल का 1x108 कोजिका प्रजत जम.ली. । संदिू ण स्ट्तर संदिू ण स्ट्तर पी एच चूणव या दानेदार के प्ररूप में िाहक अधाररत के जलए 6.5 - 7.5 और तरल अधाररत या जिलेरटन अधाररत में कैप्सूल के जलए 5.0 - 7. 5 िमता जििेिता िब स्रोत के रूप मे एल्यूजमजनयम पोटेजियम जसजलकेट का प्रयोग करते हुए दी गइ रीजत के ऄनुसार परीिण ककया गया हो तब ककस्ट्म मे तरलयूि मे जिक की कम से कम 20 जमग्रा/ली. घुलनिील िमता होनी चाजहए । 7. जिक घुलनिील बैक्टीररया कुल व्यिहायव संख्या सी एफ यू चूणव दानेदार या िाहक सामग्री का न्द्यूनतम 5x107 कोजिका प्रजत ग्राम/या कैम्सूल मात्रा अधाररत जिलेरटन प्रजत ग्राम ऄथिा तरल का 1x108 कोजिका प्रजत जम.ली. । संदिू ण स्ट्तर 105 तनुकरण पर कोइ संदिू ण नही पी एच चूणव या दानेदार के प्ररूप में िाहक अधाररत के जलए 6.5 - 7.5 और तरल अधाररत के जलए 5.0 - 7. 5 िमता जििेिता िब जिक स्रोत के रूप में जिक ओक्साआड/जिक कारबोनेट/जिक फास्ट्फेट का प्रयोग करते हुए दी गइ रीजत के ऄनुसार परीिण ककया गया ह ैतब ककस्ट्म के तरल यूि में जिक की कम से कम 20 जमली/ली. घुलनिील िमता होनी चाजहए । 8. एसीटोबैक्टर कुल व्यिहायव संख्या सी एफ यू चूणव दानेदार या िाहक सामग्री का न्द्यूनतम 5x107 कोजिका प्रजत ग्राम/या कैप्स ूल मात्रा अधाररत जिलेरटन प्रजत ग्राम ऄथिा तरल का 1x108 कोजिका प्रजत जम.ली. । संदिू ण स्ट्तर संदिू ण स्ट्तर पी एच 3.0 - 6.0 नम/िुष्क चूणव दानेदार या िाहक के जलए 5.5 – 6.0 और तरल के जलए 3.0 - 6.0 िमता जििेिता ऄधव ठोस माध्यम एन मुफ्त माध्यम मे पीली सी जिल्ली का सूत्रीकरण 9. िाहक ऄधाररत संघ अधाररत भागीदारी िैयजिक ऄियिी व्यिहायव संख्या जनम्नजलजखत सूक्ष्मिीि मे स े ककन्द्ही 2 या ऄजधकतम तीन के जमिण में न्द्यूनतम सी एफ यू :- न्द्यूनतम सी एफ य ू राआिोजबयम या एिोबैक्टर या एिोसजपररलम 1x107 प्रजत ग्राम4 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] न्द्यूनतम पी एस बी सी एफ यू 1x107 कोजिका प्रजत ग्राम (ग्रा) न्द्यूनतम के एस बी सी एफ यू 1x107 कोजिका प्रजत ग्राम (ग्रा) ईत् पाद के सभी िैि ईिवरक की कुल ‍ यिहायव न्द् यूनतम सी एफ यू िाहक/चूणव का 1x107 कोजिका प्रजत ग्राम संख्य ा िमता जििेिता मात्रात्मक अकलन के माध्यम से िैयजिक िैि ईिवरक के मामले मे यथा ईजल्लजखत जिजनश्चजयत ककये िाने िाले िैयजिक सूक्ष्मिीि का दिता स्ट्िरूप 10. तरल भागीदारी िैयजिक ऄियिी व्यिहायव संख्या जनम्नजलजखत सूक्ष्मिीि मे स े ककन्द्ही 2 या ऄजधकतम तीन के जमिण में न्द्यूनतम सी एफ यू :- न्द्यूनतम सी एफ य ू राआिोजबयम या एिोबैक्टर या एिोसजपररलम 1x107 कोजिका प्रजत ग्राम न्द्यूनतम पी एस बी सी एफ यू 5x107 कोजिका प्रजत जम.ली. (जम.ली.) न्द्यूनतम के एस बी सी एफ यू 5x107 कोजिका प्रजत जम.ली. (जम.ली.) ईत् पाद के सभी िैि ईिवरक की कुल ‍ यिहायव न्द् यूनतम सी एफ यू 1.5 x108 कोजिका प्रजत जम.ली.. (जम.ली.) संख्य ा पी एच 5.0-7.0 संदिू ण स्ट्त र ककसी तनुकरण पर कोइ संदिू ण नही मात्रात्मक अकलन के माध्यम से िैयजिक िैि ईिवरक के मामले मे यथा ईजल्लजखत िमता जििेिता जिजनश्चजयत ककये िाने िाले िैयजिक सूक्ष्मिीि का दिता स्ट्िरूप 11. फास्ट् फेट घुलनिील फंगल िैि ईिवरक बीिाणू संख्य ा न्द् यूनतम 1x106 बीिाणु/ग्रा. तरल के न्द् यूनतम 1x107 ‍ यिहायव फंगल बीिाणु/एम एल संदिू ण स्ट्त र िाहक अधाररत तैयारी के जलए तरल आनोकुलम 1x103 कोजिका प्रजत ग्राम के जलए िुन्द् य पी एच तरल – 3.5 से 5.5 िाहक – 6.0 से 7.7 िमता जििेिता िब फास्ट् फेट स्रोत के रूप मे टैररकैलजियम फास्ट् फेट या एल् यूजमजनयम फास्ट् फेट या अयरन फास्ट् फेट का प्रयोग करते हुए दी गइ रीजत के ऄनुसार परीिण ककया गया ह ै तब ककस्ट् म के तरल यूि में फास्ट् फेट की कम से कम 30 जम.ली./ली. घुलनिील िमता होनी चाजहए भाग-ख िैि ईिवरक की सहन सीमा 1. राआिोजबयम, एिोटोबैक्टर, एिोसजपररलम फास्ट्फेट घुलनिील बैक्टीररया, पोटाि संग्रह बैजक्टररया, जिक घुलनिील बैक्टीररया की दिा में कुल व्यिहायव संख्या चूणव या दानेदार के प्ररूप में िाहक सामग्री का 1x107 सी एफ यू/प्रजत ग्राम या तरल सूत्रीकरण के मामले में 5x107 सी एफ यू/प्रजत एम एल से कम नही होगी ।[भाग II—खण् ड 3(ii)] भारत का रािपत्र : ऄसाधारण 5 2. भागीदारी की दिा में, कुल व्यिहायव संख्या िाहक अधाररत की दिा में 1x107 और तरल सूत्रीकरण की दिा में 1x108 से कम नही होगी । 3. माआकोररिल िैि ईिवरक के मामले में, कुल व्यिहायव बीिाणु पूणव ईत्पाद के 8/प्रजत ग्राम से कम नही होगी ।”; (ग) भाग घ में – (I) “1क राआिोजबयम िैि ईिवरक के जिश्लेिण की रीजत” िीिव के ऄधीन पैरा 5 में ईप पैरा 3 के स्ट्थान पर जनम्नजलजखत ईप पैरे रखे िाएंग,े ऄथावत् :- “5.3 प्रककया 5.3.1 1 जमनट तक बीिों को 70 प्रजतित एल्कोहल में डुबोए, ऄल्कोहोल को जनकाल दे और बीिों को 3 जमनट तक तािा तैयार ककए गए 5% सोजडयम हाआड्रोक्लोराआड घोल में बीि को डूबाये या पेच टोपीदार बोतल या रबड से लटकाने िाली परीिण नली से ककसी ईपयुि अधान में तीन जमनट तक 0.1 प्रजतित मरक्यूररक क्लोराआड घोल में डुबोद ें । जनिीिाणुक को जनकाल द े और जनिीिावणुक से मुि होने के जलए िीिाणुहीन िल से बीिों को कइ बार कम से कम दस बार धोएं । 5.3.2 जमट्टी के पात्र या काजचत पात्र जमट्टी 2 भाग जमट्टी और 1 भाग ऄपररष् कृतरत) (पी एच 6 से 7) से भरे और 120 जडग्री सेंटीग्रेड पर 2 घंटे तक ईजष् मत करे, कि तापमान में दो कदन के ईष् मायन के पश्चात्, जमट्टी की पूणव जनिीिाणुता सुजनजश्चत करने के जलए ईजष् मत करे । 5.3.3 जनिीिाणाकृत बीि को प्रजत 50 ग्राम बीि के जनिीिाणु िल के साथ 2 जम. ली. जमजित 1 ग्राम का टीका िाले कल्चर पैकेट से कदए गए टीके के गदले िले से ईपचार करे टीका न लगाए गए बीि (जनिीिाणुकृत ऄपनी सतत परन्द्तु टीके से ऄनुपचारजत) के साथ पात्रो को एक सैट जनयंत्रण के रूप मे रखे । पररितवनो से जनपटने के जलए प्रत्येक ईपचार के जलए कम से कम चार या पॉंच पात्र रखे । 5.3.4 परीिण पौधों के जलए समुजचत मौसमो के दौरान ईन्द्हे पात्र-कल्चर हाउस मे ईष्मायन को जनयंत्रण पात्र से टीका लगाए गए पात्र पाते को ऄलग करने का ध्यान रखे । िैकजल्पक रूप से 16 घंटे के प्रकाि और 8 घंटे के ऄंधेरे के साथ तापमान (28 सेजल्सयस) ; अरतव ा (65 %) और प्रकाि तीव्रता (10 ककलो लक्स) को समायोजित करने की सुजिधा िाले जनयंजत्रत पयाविरणीय पररस्ट्थजतयों के ऄधीन ग्रोथ चेंबर या ग्रोथ कैजबनेट्स मे टीका लगाए गए गए और टीका न लगाए गए पात्र को ईष्मायन करे । 5.3.5 ईष्मायन के पहले कदन प्रत्येक पात्र को एक बार जनष् कीरटत ग्रोथ माध्यम (5.1 में यथाजनर्ददष्ट) के साथ जमट्टी की नमी-धारण िमता तक जसचाइ करे । तत्पश्चात् बीिो को समय समय पर जनष् कीरटत पानी से पानी दे, टीका लगाए गए (पात्र) से टीका न लगाए गए पात्र तक पानी जिडकाि को रोकने के जलए ध्यान रखे । 5.3.6 दो सप्ताह की प्राजप्त के बाद, प्रत्येक पात्र मे पौधो की संख्या को चार समान पौधो तक कम कर द े । 25 कदनों के ऄंत म े पौधो को धीरे बहते पानी के नींचे जमट्टी से सािधानीपूिवक ऄलग करे, टीका लगाए गए और टीका न लगाए गए पौधो को ऄलग रखे । प्रत्येक पौधे पर नोडयूल्स की संख्या को ऄलग ऄलग टीका लगाए गए और टीका न लगाए गए पात्र में ररकाडव करे । ऄलग-ऄलग पौधो (ऄँकुसा+िड़) को एक ओिन मे 60 जडग्री सेजल्सयस पर 48 घंटे के जलए ऄलग से सुखाए और सूखा ििन ररकाडव करे । टीका लगाए गए और टीका न लगाए गए पौधो के औसत िुष्क ििन की गणना करे । 5.3.7 िुष्क पदाथव की ईपि मे िृजि की गणना जनम्नप्रकार है िुष्क पदाथव मे िृजि प्रजतित डब्लू 1 – डब्लू 2 X 100 डब्लू 2 िहां डब्लू 1 = टीका लगाए गए पौधे के ऄंकुर का औसत सूखा ििन डब्यू 2 = टीका न लगाए गए पौधे के ऄंकुर का औसत सुखा ििन जनयंत्रण 5.3.8 यकद टीका लगाए गए पौधो मे पूणव ऄनुपजस्ट्थजत या कभी 2 जनयंत्रण मे जिचजलत नॉड्युल की ईपजस्ट्थजत के साथ ऄछिा नॉडयूलेिन प्राप्त होता ह ै और यकद ऄसंक्रजमत जनयंत्रण पर पौधो के िुष्क रव्यमान मे 25% की िृजि होती ह ै तो जनष्किव जनकाला िा सकता ह ैकक तनाि पयावप्त रूप से नॉडयूजलग ह ैऔर प्रभािी ह ै।”- II 1 सी एिोसजपररलम िैि ईिवरक के जिश्लेिण की रीजत िीिव के ऄधीन – (i) पैरा 1 से पहले जनम्नजलजखत ईप-िीिव ऄंत:स्ट्थाजपत ककए िाएंगे, ऄथावत् :- “कुल व्यिहायव संख्या और पतली जिल्ली सूत्रीकरण को जिजनजश्चत करने की रीजत” (ii) सारणी 1 और ईससे संबंजधत प्रजिजष्टयों के पश्चात जनम्नजलजखत पैरा ऄंत:स्ट्थाजपत ककया िाएगा, ऄथावत् :-6 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] सदं िू ण के ऄिधारण की पिजत- मध्यम केएच2 पी ओ 4 – 0.5 ग्राम जमग्रा एस ओ 4.7 एच 20 – 0.2 ग्राम एन ए सी एल 1 - 0.1 ग्राम खमीर तत्ि 0.5 ग्राम एफ इ सी एल 13.6 एच20 – 0.15 ग्राम डी एल-मैजलक एजसड- 4.8 ग्राम के ओ एच – 4.8 ग्राम *कांगो जिभेदन – 15.0 जम.ली. ऄपसिस्ट्या – 20.0 ग्राम िल - 1000 जम.ली. *के ओ एच के 0.1 एन के साथ पी एच 7 के जलए समायोिन 1000 जम.ली. िल में 2.5 ग्राम भार कांगो लाल घोल रटप्पण 1 ;प्लेट संगणानाओं के ईष्मायन, प्लेट गणनाओं के जलए क्रमांक ऄिजमिण प्लेटों के जलए क्रमांक ऄिजमिण प्लेटों के जलए जिसंक्रमण जिजनर्ममत की प्रकक्रया और ईपजनिेिों की गणना –ररिोजबयम के रुप में िहीं रटप्पण 2 ; रोिो कांगो मध्यम एिोसपीररलम (क. जलपोफेरम और क. ब्रािीलेंस) 1.5 से 2 जममी व्यास) की जस्ट्थरता िुष्क के साथ लाल कालजनयों केिेस्ट्क, गोल या ऄजनयजमत रुप ईर्मभमान तीिणता और मध्य से जिककरणकारी तीिणताओं के साथ सतह भुरीिया के रुप में प्रतीत होता हो । III िीिवक के ऄधीन “1.स माआकोररिल बायोफटीलाआिर” के जलए जिश्लेिण की पिजत “3. कुल िीिनिय बीिाणओंु का प्राक्कलन ऄजं तम ईत्पाद स ेबीिाणओंु की सस्ट्य ऄ. गीला िोिक और जिस्ट्तारण पिजत द्वारा (क) ईपस्ट्कर और प्रजतकमकव : नाआलोन या ईत्पाद या नमूना से िीिनिय पृथक के जलए िीिनिय अकारों की िृहद िृंखला और नायलोन या िाली ऄंगरोधी आस्ट्पात िोिकों को घेरना (i) सूक्ष्म अकारो िीिनियों के जलए 40-50 माआक्रान (0.04 जम.मी.)) िोिक (ii) मध्यम अकारी िीिनियमों के जलए 100 माआक्रान (0.14 जम.मी.) िीिनिम (iii) ऄजधक िृहद अकारी िीिनियमों और स्ट्पोरकापवस के जलए 250 माआक्रान (0.25 जम.मी.) िीिन िय (iv) मूल ऄंिाभ्यास और ऄन्द्य मलबा हटाने के जलए 450 माआक्रोन (0.45 जम.मी.)) िोिक (v) मूल ऄंिाभ्यास और ऄन्द्य मलबा हटाने के लए 1 जमलीमीटर िोिक (vi)प्रिालन बोतलें में ऄंतर्मिष्ट िल (vii) िोिक संग्रहण के जलए मतवबान (viii) जत्रजिमदिी (ix) जत्रजिमदिी के ऄधीन िीिवक ऄिलोकन के जलए पैरी तितररयां (11 से.मी.) (x) चयन बीिाणु के जलए माआक्रोपेंटस (xi) ऄपकेंकरत (ख) प्रकक्रया िल का सारिान मात्रा में जमिीत 100 ग्राम माआक्रोकफिल िैि ईिवरक और िाली अकार के क्रम के ऄििोिण में िोिकों की िृंखलाओं के माध्यम से जनस्ट्तारण को व्यिजस्ट्थत ककया िाता ह ै । मूलों और ऄपररिकृत िोिकों (1 जमलीमीटर और 450 माआक्रोन) पर िोिक मलबों पर संग्रहण ककया िाता ह ै िब कक धातुिोिक एक या ऄजधक पर बीिाणुओं को प्रगहजणत ककया िाता ह ै िल के साथ प्रबल प्रिालन मरटयार भाररक सामग्री या काबवजनक सामग्री के समूहों से बीिाणुओं को मुि होने के जलए अिश्यक ह ै । मात्र मतवबानों म ें[भाग II—खण् ड 3(ii)] भारत का रािपत्र : ऄसाधारण 7 िोिक को संग्रहण करे । पेरी तितरी और स्ट्टेररयोस्ट्कोप के ऄधीन ऄिलोकन संग्रजणत के जलए ईन पर िोि को हस्ट्तांतरण करे । प्लेट तितरी में बीिाणुओं की संख्या में गणना करें और नमूना के बीिाणु ग्राम के रुप में आसे ऄजभव्यि करें । (अ) सरैं ीकफगएु िन प्रिणता आििु कं वरा द्वारा (िैकजल्पक) (i) ईपरोि िर्मणत पिजत द्वारा िोिक में संग्रहण करें । सेंटीफींग ट्यूब और िैजति घूणवन में 1,750 अर पी एम पर 5 जमनट के जलए ईसमें बीिाणुओं को हस्ट्तांतरण करें । (ii) सािधानी से पलािी रि को जनस्ट्तारण करें और 60% इिुरा घोल में गुरटका को पुनः रोक लें । पुनः 2-5 जमन्द्ट के जलए पुनः सेंररकफक करें । (iii) 45 माआक्रान िोिक में पलािी (बीिाणुओं के साथ) ईड़ेलें और िकवरा हटाने के जलए िल साथ अिालन करें । पेरी तितररयां/ प्लेट घिवजणत में िलनी को हस्ट्तांतररत करें और जिन्द्यासदिी के ऄधीन ऄिलोकन करें । प्लेट/ तश्तरी में बीिाणुओं की संख्या की गणना करें और नमूना के बीिाणुओं की संख्या की गणना करें और नमूना के बीिाणुओं की संख्या की गणना करें और नमूना के बीिाणुओं ग्राम के रुप में आसे ऄजभव्यि करें । 3.2 बीिाण ुऄजभरंिन (क) ईपस्ट्कर और ऄजभकमकव (1) पूिव िणवन के ऄनुसार बीिाणु जनष्किवण के जलए ईपस्ट्कर और ऄजभकमवक (2) 2,5-जडकफनायल-2एन टेरािोजलयम ब्रोमाआन (एम.टी.टी) (3) असतु िल (4) ऐजपराफ टयूब (5) जिन्द्यासदिी (6) पेरी तश्तररया ं (ख) प्रकक्रया i. एम टी टी (2,5-डाआकफनाआल- 2 एन-टेरािोजलयम ब्रोमाआड) का 0.25 % घोल तैयार करें ii प्रकाि में एम टी टी घोल के खुलाि से बचें क्योंकक ऄजभरंिन हलकों सूक्ष्मग्राही ह ैं iii ऄजभरंिन घोल में ईपयुवि िर्मणत दो पिजतयों में कोइ द्वारा संगजहत बीिाणुओं (संख्या में लगभग 50) के ए एम एफ तािे संग्रहण में िोंड़ें और ऄंधेरे में िीिाणुहीन एपेनड्रोफ टयूबों में 27 जडग्री सेंटीग्रेड पर ईष्मायजनत करें । iv. 24 घंटे, 48 घंटे और ईष्मायन 72 घंटों के पश्तात् िेत्र के ऄंधेरे के ऄधीन जत्रजिमदिी ईपयोग करते हुए ऄजभकक्रयाओं के जिजभन्न रंगों के जलए बीिाणुओं का ऄिलोकन करें । v. ऐसे बीिाणु िो लाल या गुलाबी ऄजभरंिक हैं, जनम्नजलजखत फामूवला के ऄनुसार िीिनियम है %बीिाणु = बीिाणुओं की सख्ं यां िो लाल या गुलािी ऄजभरंिक ह ै X 100 िीिनिमता कुल बीिाणुओं की संख्या 4.1 सभं ाव्य सरं ोप का जनधारव ण (क) सामग्री की अिश्यकता (i) ऄनािश्यक कागि/प्लाजस्ट्टक कप (250 जमजललीटर) या पी.िी.सी. टयूब (15 से.मी.लंबा 3.2 से.मी. डायामीटर) (ii) प्लाजस्ट्टक थैली (30 से.मी. x 20 से.मी.) (iii) जनिीर्मित तनुकारी (रेत: मृदा जमिण 1:1) (iv) प्याि या रागी बािरा (रागी) (ख) प्रकक्रया (i) प्लाजस्ट्टक थैली में नमूना का 30 ग्राम तौंले और नीर्मिजित तनुकारी (रेत: मृदा जमिण 1:1) । 10-1 तनुकारी पाने के जलए पूणवतः जहलाएं । (ii)तनुकारी 10-1 से 30 ग्राम हटाए और नीर्मिजित तनुकारी का 270 ग्राम ऄंतर्मिष्ट थैले ऄन्द्य दसू रे स्ट्थान पर रखें । 10-2 तनुकारी पाने के जलए पूणवतः जहलाएं । तनुकारी 10-4 तथा तनुकारी िृखंलाओं दस परत बनाएं (या ईच्चतम तनुकारी यकद अिश्यक हो) (iii) कागि /प्लाजस्ट्टक प्याले या पी िी सी टयूब्स में प्रत्येक तनुकारी से व्यिकालक को जितररत करें । पांच बार दोहराकर आसका ईपयोग करें ।8 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] (iv) प्रत्येक प्याले में प्याि /रागी बािरे के बीिों को बोएं (v) ईभड़ने के पश्चात् प्रजत ट्यूब /प्याला केिल पौधा के जलए तनु ऄधोिाही और पाद्प गृह में पौधों को बढ़ने दो या 45 कदन (कागि में/ प्लाजस्ट्टक प्याले) या 25 कदन (पी िी सी ट्यूबों में) के जलए कि को प्रस्ट्फुरटत करें । (vi ) िस्ट्य पर व्यिकलक से मुि निऄंकुरों को और राआपन नीले के साथ ईन्द्ह ें ऄजभरंिन को धोएं (ऄजभरंिन प्रकक्रया नीचे कदया गया ह)ै । (vii) सूक्ष्मदिी जिजभत मत के ऄधीन प्रत्येक दोहराने बनान ेमें माआक्रोकफिल की ईपजस्ट्थजत या ऄनुपजस्ट्थजत का ऄिधारण करें । एम पी एन गुरुतोंओं की गणना के जलए जिजभन्न तनुकरण में सकरात्मक ट्यूब (िो मायराफील में िाजमल हो) की गणना करें । (viii) एिोजसररजबजलयम िैि ईिवरकों के जिश्लेिण की पिजत के ऄधीन सारणी 1 5.3.3, 1 सी पर कदए गए कोहरण (195)) की एम पी एन सारजणयों का ईपयोग करें । रटप्पण : 1- पी िी सी ट्यूिों का ईपयोग लाभकारी ह ैक्योकक यह ियपकालक से कम ईसके साथ 25 कदन पररणाम दते ा ह ै। 4.2 एम पी एन प्रक्कलन के जलए रीजत जिज्ञान और स्ट्पष्टीकरण : (i) गणना में ईदाहरण के जलए िो चार ततुकरणों (10-1, 10-2, 10-3 और 10-4) में से प्रत्येक बार (ट्यूब) दोहराएं सकारात्मक ट्यूबों िैसे 5,5,3,2की सम्मीिण की संख्या को ऄजभप्राप्त करें । (ii) यह ऄथव ह ै कक 10-1 और 10-2 तनुकरण पर माआक्रोजहिल बनाने के जलए सभी 5 बार दोहराए ताकक सकारात्मक हो और तनुकरण 10-3 पर 3 बार दोहराए ताकक ट्यूबें सकारात्मक हो तथा तनुकरण 10-4 पर 2 बार दोहराएं ताकक ट्यूबें सकारात्मक हों । एम पी एम की संगणना के जलए केिल ऄंजतम तीन तनुकरण का सजम्मिण दने ा ऄपजे ित ह ैं। (iii) पहली संख्या (पी 1) कम से कम तनुकरण के जलए ऄनुरुप हो जिसमें माआक्रोजहिल बनाने के जलए ट्यूबों (या ऄजधकतम संख्या सकारात्मक रह)ें ऄगले दो तनुकरणों के जलए दो ऄन्द्य संख्याकों को (पी 2 और पी 3) िो ऄनुरुप रह।ें ईपयुवि ईदाहरण में सजम्मिण पी1 =5, पी2 = 3 और पी 3= 2 होगा । (iv) ऄब कक एम पी एस सारणी में संख्याओं कतार पर पाए जिसम ेंपी 1 और पी 2 संख्याओं के जलए ऄनुरुप रह ेंजिसे प्रयोगात्मक ऄिलोककत ककया ह ै। ऄनुसरण करें कक पी 3 का िेल द्वारा ऄिलोककत द्वारा ईन्द्मुख स्ट्तंभ की सारणी में संख्याएं कतार के पार हो । तैयार ईत्पाद नमूना में प्रजतजनजधक मूल नमूना की मात्रा में िीजियों की ऄजधकतम संभाव्य संख्या प्रजतछिेदी जबद ु पर ऄंक ऄजधकतम सख्या हो । योग अइ पी /ग्राम = एम पी एन सारणी x एम पी ए सारणी तनुकारी पी 2 ईत्पाद के िुष्क ढेर से जलया गया नमूना [ईदाहरण – एम पी एन सारणी का ईपयोग करें यह सकारात्मक का सजम्मिण 1.4 ह)ै नमूना में एबीआक्यूटर णाआक्रोजहिल फंगस (ए एम एफ) के बढ़ाने में जनफ्प्रभाि का एम पी ऄजभप्राप्त करने के जलए आस मूल्य को मध्य तनुकारी (यह 10-3 मामले में ) द्वार गुजणत ककया िाना ह।ै आसजलए, मृदा में 1.4 x 103 संक्रामक प्रोपेग्यूल/ ग्राम नमूना (1.4 x 103 अइ पी/ ग्राम या 1400 अइ पी/ ग्राम) ह।ै 4.3 ईपजनििे न माआक्रोजहिल ऄिलोकन के जलए मूलों का ऄजभरंिन ए एम एफ द्वारा ऄंतःस्ट्िचाजलक कोिाणु मूल का ईपजनिेिन पदरचना जिज्ञान मूलरुप से बदलता नहीं ह ै।आसजलए साफ और ऄजभरंिन प्रकक्रया के जलए पता लगाने और माक्रोजहिल ईपजनिेिन ईपाय के ऄध्यधीन ह ै। (क) अिश्यक सामग्री (i) 10% के ओ एच घोल (पोटेजियम हाआड्राक्साआड) (ii) 1% एच सी एल घोल (हाआड्राक्लोररक ऄम्ल) (iii) लैक्टो जग्लसरॉल घोल (20 जमली लैजक्टक एजसड, 40 जमली जग्लसरॉल, 40 जमली जडजस्ट्टल्ड िॉटर) (iv) लैक्टो जग्लसरॉल घोल में 0.05% ररपैन ब्लू (0.5 ग्राम/लीटर) (ख) प्रकक्रया 1. मृदा कचरा से मलू ों को साफ करें और टोटी िल के ऄनेक पररितवनों में अिालन करें । 2. 1 घंटे के जलए 90 जडग्री सेंटी ग्रडे या 15 जमन्द्ट के जलए 120 जडग्री सेंटी ग्रेड पर 10% के ओ एच में मलू ों को सुखाएं ।[भाग II—खण् ड 3(ii)] भारत का रािपत्र : ऄसाधारण 9 3. के ओ एच हटाएं और के ओ एच हटाने के जलए िल (2-3 बार) के साथ मलू ों को अिालन करें । 4. 5 जमन्द्ट के जलए 1% एच सी एल म ेंमूलों को सुखाएं । 5. एच सी एल को हटाए। आस कदम के पश्चात् मलू अिालन करें आसी तरह स ेसमुजचत ऄजभरंिन के जलए ऄम्लीकृत ऄिश्य होना चाजहए । 6. 1 घंटे के जलए 900 जडग्री सेंटी ग्रेड या 5 जमनट के जलए 1200 जडग्री सेंटी ग्रडे पर कणवपटल नीला ऄतं र्मिष्ट करके ऄम्लीय ग्लीककरोल घोल में मूलो को स्ट्टेन करें । 7. स्ट्टेन को ऄलग करें और ऄिलोकन तक लैक्टो जग्लसरॉल म ेंमलू ों को सुरजित करें । 8. मूलों को लगभग 1 स.ेमी. टुकड़ों में काट ल ें और लैक्टो जग्लसरॉल के साथ सूक्ष्मदिी स्रालाआडों में हथले ी पर रखें, और सरका के अिरण स्ट्थान पर रखें माआकोररजहिल बनाने के जलए सूक्ष्मदिी के ऄधीन ऄिलोकन करें । (IV) ऄनुसूची IV में - (क) भाग क में (ऄ) पैरा 1 में, कचरा जमजित खाद I मद (v) में प्रतीक और ऄंक <“1.0” के स्ट्थान पर प्रतीक और ऄंक “<1.20”, रखा िाएगा ; II मद (xi) में ऄंकों “6.5-7.5” के स्ट्थान पर ऄंकों “6.0-8.0”, रखा िाएगा ; III मद (xii) में ऄंक “4.0” के स्ट्थान पर ऄंक “6.0”, रखा िाएगें ; (अ) पैरा 3 में I मद (iv) में ऄंक “7.9” के स्ट्थान पर ऄंक “10.0”, रखे िाएगें ; II मद (vi) में ऄंक “10.4” के स्ट्थान पर ऄंक “8.0”, रखे िाएगें ; III मद (ix) में ऄंक “8.2” के स्ट्थान पर ऄंक “10.0”, रखे िाएगें ; (आ) पैरा 4 में मद (xi) में ऄंक के स्ट्थान पर “4.0” ऄंक “5.0”, रखे िाएगें; (ख) भाग ख और आससे संबंजधत प्रजिजष्टयों के स्ट्थान पर जनम्नजलजखत भाग और प्रजिजष्टयां रखी िाएंगी । “भाग ख काबजव नक ईिरव कों की सहय्ता सीमा कचरा जमजित खाद के मामले में नाआरोिन, फास्ट्फोरस और पोटेजियम पोिक तत्िों का कुल योग 1 प्रजतित से कम नहीं होना चाजहए, िमीकम्पोस्ट्ट के मामले में 2.5%, िैजिक खाद के मामले में 2.8% से कम नहीं होना चाजहए। पी अर ओ एम के मामले में पी2ओ5 सामग्री के संदभव में फॉस्ट्फेट सामग्री 7.8% से कम नहीं होनी चाजहए। (आ) ऄनुसूची (IV) में भाग घ म ें “काबवजनक ईिवरकों के जिश्लेिण की पिजत” प्रपुंि घनत्ि के प्रक्कलन क्रम संख्या 3 में “गणन” िािवक के परै ा के स्ट्थान पर जनम्नजलजखत परै ा रखा िाएगा, ऄथावत:्- “पररकलन प्रपुंि घनत्ि नमूना का भार (डब्लय ू2- डब्ल्यू 1) मात्रा (िी 2) िहां डब्ल्यू 1 = 100 मीलीलीटर िुष्क जसलेंडर का भार डब्ल्यू 2 = 100 मीलीमीटर जचन्द्ह तक नमूने के साथ जसलेंडर का भार िी 1 = सघन (100 जमलीलीटर जचन्द्ह तक) से पूिव जसलेंडर में नमूना की मात्रा िी 2= संघ के पश्चात् जसलेंडर में नमूना की मात्रा”; (V) प्ररुप ‘ञ’ में – (क) क्रम संख्या (3) म,ें प्रजिजष्ट (iv) के पश्चात ्जनम्नजलजखत प्रजिजष्ट ऄंतःस्ट्थाजपत की िाएगी, ऄथातव :्-10 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] “(v) बैच ईत्पाद ऄिसान की तारीख”; (ख) क्रम संख्या 13 म,ें “नाम और पता” िब्दों के स्ट्थान पर “नाम, पता और इ-मेल अइ डी” ऄतं ःस्ट्थाजपत ककया िाएगा । [फा. सं. 2-5/2020 ईिव. जिजध] नीरिा ऄजिडम, संयुक् त सजचि रटप्पण : मूल अदिे सा.का.जन. 758 (ऄ), तारीख 25 जसतंबर, 1985 द्वारा भारत के रािपत्र म ें प्रकाजित ककया गया था और का.अ. 2333 (ऄ) तारीख 14 िून, 2021 द्वारा ऄंजतम संिोधन ककए गए थे। MINISTRY OF AGRICULTURE AND FARMERS WELFARE (Department of Agriculture, Cooperation and Farmers Welfare) ORDER New Delhi, the 1st July, 2021 S.O. 2671 (E). — In exercise of the powers conferred by section 3 of the Essential Commodities Act, 1955 (10 of 1955), the Central Government hereby makes the following Order further to amend the Fertiliser (Inorganic, Organic or Mixed) (Control) Order, 1985, namely:— 1. (1) This Order may be called the Fertiliser (Inorganic, Organic or Mixed) (Control) Fifth Amendment Order, 2021. (2) It shall come into force on the date of its publication in the Official Gazette. 2. In the Fertiliser (Inorganic, Organic or Mixed) (Control) Order, 1985, (hereinafter referred to as the said Order),- (i) in clause ( 2), in sub-clause (nna), for the brackets and words ―(such as Castor, Neem)”, the words “including Castor, Neem, Karanj (Pongamiapinnata), Mahua (madhucalongifolia) and Jatropha‖ shall be substituted; (ii) In clause (30), for sub- clause (2) the following shall be substituted, namely:— ―(2) The laboratory shall analyse the sample and forward the analysis report to the authority specified in the memorandum referred to in sub-clause (1) in the following manner, namely:— (a) in case of fertiliser, other than biofertilizer, organic fertilizer and de oiled cake fertilizer, the analyzing report shall be in Form L and forwarded within fifteen days; (b) in case of the sample of organic fertilizer, the analysis report shall be in Form L1, and forwarded within thirty days; (c) in case of biofertilizer, the analysis report shall be in Form L2 and forwarded within forty-five days; (d) in case of deoiled cake fertilizer, the analysis report shall be in Form L3 and forwarded within thirty days from the date of receipt of sample in the laboratory.‖; (iii) in Schedule III,- (a) for the brackets, words, figure and letters ―[See clause (h) and (q)]‖, the brackets, words, figure and letters ―[See clause (q)‖ shall be substituted; ( b) for Part A and Part B and the entries relating thereto, the following Parts and entries shall be substituted, namely: — ― Part A SPECIFICATION OF BIOFERTILISER 1. Rhizobium Total viable count CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material/or per gram capsule content in gelatin base or 1x108 cell per ml of liquid.[भाग II—खण् ड 3(ii)] भारत का रािपत्र : ऄसाधारण 11 Contamination level No contamination at 105 dilution. pH 6.5-7.5 Efficiency character Should show effective nodulation on all the species listed on the packet and there should be minimum of 25% increase in dry matter yield in test plant, after 25 Days After Sowing (DAS) when tested as per the method given under controlled conditions. 2. Azotobacter Total viable count CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or per gram gelatin bases capsule content or 1x108 cell per milliliter (ml) of liquid. Contamination level No contamination at 105 dilution. pH 6.5-7.5 Efficiency character The strain should be capable of fixing at least 10 mg of nitrogen per gram of sucrose consumed. 3. Azospirillum Total viable count CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or per gram gelatin bases capsule content or 1x108 cell per milliliter (ml) of liquid. Contamination level No contamination at 105 dilution. pH 6.5-7.5 Efficiency character Formation of white pellicle in semisolid Nitrogen free Bromothymol blue media. 4. Phosphate Solubilising Bacteria Total viable count CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or 1x108 cell per milliliter (ml) of liquid. Contamination level No contamination at 105 dilution. pH 6.5-7.5 for moist/dry powder,granulated carrier based and 5.0-7.5 for liquid based. Efficiency character The strain should be capable of solubilizing at least 30 mg/litre of Phosphorus in liquid broth when tested as per the method given using Tricalcium Phosphate or Aluminium Phosphate or Iron Phosphate as Phosphate source. 5. Mycorrhizal Biofertilisers Total viable spores/gram of product Minimum 10 viable spore per gram of finished product. pH 6.0-7.5 Inocculum potential 1200 IP per gram of finished product by MPN method with10 fold dilution. 6. Potassium Mobilising Biofertilisers (KMB) Total viable Count CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or or per gram of capsule content or 1x108 cell per milliliter (ml) of liquid. Contamination level No contamination at 105 dilution. pH 6.5-7.5 for carrier based in the form of powder or granules and 5.0-7.5 for liquid base or capsule in gelatin based. Efficiency character The strain should be capable of solubilizing at least 20 mg/litre of Potash in liquid broth when tested as per the method given using Aluminium Potassium Silicate as K source.12 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] 7. Zinc Solubilising Bacteria Total viable count CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or per gram of capsule content 1x108 cell per milliliter(ml) of liquid. Contamination level No contamination at 105 dilution. pH 6.5-7.5 for carrier based in the form of powder or granules and 5.0-7.5 for liquid base. Efficiency character The strain should be capable of solubilizing at least 20 mg/litre of Zinc in liquid broth when tested as per the method given using Zinc Oxide/ Zinc Carbonate/ Zinc Phosphate as Zinc source. 8. Acetobacter Total viable count CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or per gram of capsule content 1x108 cell per milliliter (ml) of liquid. Contamination level No contamination at 105 dilution. pH 5.5- 6.0 for moist /dry powder, granulated or carrier and 3.0-6.0 for liquid. Efficiency character Formulation of yellowish pellicle in semi solid medium N free medium. 9. Carrier Based Consortia Individual organism viable Count CFU minimum in a mixture of any 2 or maximum three of following micro-organisms: CFU minimum Rhizobium or Azotobacter or Azospirillum 1x107 cells per gram (g). CFU minimum PSB 1x107 cells per gram (g) CFU minimum KSB 1x107 cells per gram (g) Total viable count of all the biofertilisers in the product CFU minimum 3x107 cells per gram of carrier/powder. Efficiency character The efficiency character of individual microorganisms to be determined as mentioned in case of individual biofertilizers through quantitative estimation methods. 10. Liquid Consortia Individual organism viable count CFU minimum in a mixture of any 2 or maximum three of following microorganisms: CFU minimum Rhizobium or Azotobacter or Azospirillum 5x107 cells per milliliter (ml). CFU minimum PSB 5x107 cells per milliliter (ml). CFU minimum KSB 5x107 cells per milliliter (ml). Total viable count of all the biofertilisers in the product CFU minimum 1.5x108 cells per milliliter (ml). pH 5.0-7.0 Contamination level No contamination at any dilution. Efficiency character The efficiency character of individual microorganisms to be determined as mentioned in case of individual biofertilizers through quantitative estimation methods.[भाग II—खण् ड 3(ii)] भारत का रािपत्र : ऄसाधारण 13 11. Phosphate Solubilising Fungal biofertilisers Spore Count Minimum 1x106 spores/gram Minimum 1x107 viable fungal spores/ml of the liquid. Contamination level Nil for liquid inoculums 1x103 cells per gram for carrier based preparation. pH Liquid: 3.5 to 5.5 Carrier: 6.0 to 7.7 Efficiency character The strain should be capable of solubilizing at least 30 mg/litre of Phosphorus in liquid broth when tested as per the method given using Tricalcium Phosphate or Aluminium Phosphate or Iron Phosphate as Phosphate source. Part B TOLERENCE LIMITS OF BIOFERTILIZER 1. In case of Rhizobium, Azotobacter, Azospirillum Phosphate Solubilising Bacteria, Potash Mobilising Bacteria, Zinc Solubilising Bacteria, the total viable count shall not be less than 1x107 CFU/gm of carrier material in the form of powder or granules or 5x107CFU/ml in case of liquid formulations. 2. In case of Consortia, the total viable count shall not be less than 1x107 in case of carrier based and 1x108 in case of liquid formulations. 3. In case of Mycorrhizal biofertilizers, total viable spores shall not be less than 8/gm of finished product.‖; (c) in part D ,- (I) under the heading ― 1 A Method of Analysis of Rhizobium biofertilisers‖, in paragraph 5, for sub- paragraph 3, the following sub-paragraph shall be substituted, namely :- “5.3 Procedure 5.3.1 Immerse the seeds in 70 percent alcohol for 1 minute, drain the alcohol and immerse the seeds in freshly prepared 5% Sodium Hypochlorite solution for 3 minutes or in 0.1 percent Mercuric Chloride solution for 3 minutes in a suitable container such as a screwcapped bottle or a test tube with a rubber hung. Drain the Sterilant and wash the seeds several times with sterile water (at least ten times) to get rid of the Sterilant. 5.3.2 Fill earthenware or glazed pot with soil (2 parts soil and 1 part washed coarse sand) (pH 6 to 7) and autoclave for 2 hours at 1200 C. After two days incubation at room temperature, repeat autoclaving to ensure complete sterility of soil. 5.3.3 Treat surface sterilized seeds with water slurry of inoculant taken from a culture packet @ 1 gm inoculant mixed with 2 ml of sterile water per 50 gm seed and sow the seeds. Keep a set of pots with uninoculated seeds (surface sterilized but not treated with inoculant) as control. Keep minimum of 4-5 pots for each treatment to overcome variations. 5.3.4 Incubate them in a pot-culture house during appropriate seasons for test plants, taking care to separate the inoculated pots from the control pots. Alternatively incubate the inoculated and uninoculated pots in growth chamber/or growth cabinets under controlled environmental conditions having facilities to adjust temperature (280C), humidity (65%) and light intensity (10 Kilo Lux) with 16 hours light and 8 hours dark period. 5.3.5 On day 1 of incubation irrigate each pot once to the moisture holding capacity of soil with sterilized growth medium (as specified at 5.1). Subsequently, water the seedling periodically with sterilized water, taking care to prevent splashing of water from inoculated pots to uninoculated ones.14 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] 5.3.6 After two weeks of growth, thin down the number of plants in each pot to four uniform plants. At the end of 25 days, separate the plants carefully from the soil under slow running water. Keep inoculated and uninoculated plants separately. Record the number of nodules on each plant, separately from inoculated and un-inoculated pots. Dry the individual plants (shoot + root) in an oven at 600C for 48 hours, separately and record dry weight. Calculate average dry weight of inoculated and un-inoculated plants. 5.3.7 Calculate the increase in dry matter yield as under W1 – W2 % increase in dry matter = x 100 W2 Where W1 = average dry weight of inoculated plant shoot W2 = average dry weight of control un-inoculated plant shoot. 5.3.8 If good nodulation is obtained in inoculated plants together with total absence or sometimes presence of stray nodules in controls and if there is a 25% percent increase in the dry mass of plants over the uninoculated control, it may be concluded that the strain is adequately nodulating and is effective.‖; II. Under the heading‖ 1C Method of Analysis of Azospirillum biofertilizers,‖- (i) before paragraph 1, the following sub-heading shall be inserted, namely:- ―Method of determination of total viable count and Pellicle formation‖ (ii) after Table 1 and entries relating thereto, the following paragraph, shall be inserted, namely:- B. Method of determination of Contamination Medium KH2PO4 0.5gram MgSO4.7H2O 0.2 gram NaCl 0.1 gram Yeast Extract 0.5 gram FeCl3.6H2O 0.015 gram DL-malic acid 5.0 gram KOH 4.8 gram *Congo resolution 15.0 ml Agar 20.0 gram Water `1000 ml Adjust to pH 7 with 0.1N of KOH *Congo red solution weigh 2.5 g in 1000 ml water Note 1;- Sterilizing and preparation procedure for plates, serial dilution for plate counts, incubation of plates and counting of colonies – Same as of Rhizobium. Note 2;- On Rojo Congo medium, Azospirillum (A. lipoferum and A. brasilense) colonies shall appear as scarlet red colonies with dry consistency, diameter of 1.5 to 2 mm, round or irregular form, undulate edge, and rugose surface with ridges radiating from the center. III. Under the heading ―1. E. Method of analysis for Mycorrhizal Biofertlisers‖, for paragraphs 3 and 4, the following paragraphs shall be substituted, namely:- “3. Estimation of total viable spores Harvesting of spores from finished product A. By wet sieving and decantation method[भाग II—खण् ड 3(ii)] भारत का रािपत्र : ऄसाधारण 15 (a) Equipment and Reagent: Stalking sieves with nylon or stainless steel mesh and a large range of pore sizes for isolating spores from the product or sample (i) 40-50 micron (0.04 mm) sieve for small sized spores. (ii) 100 micron (0.14 mm) sieve for medium sized spores. (iii) 250 micron (0.25 mm) sieve for very large sized spores and sporocarps. (iv) 450 micron (0.45 mm) sieve for removing root bits and other debris. (v) 1 mm sieve for removing root bits and other debris. (vi) Wash bottles containing water. (vii) Jars for collecting the sieving. (viii) Stereomicroscope (ix) Petri dishes (11 cm) for observing the sieving under stereomicroscope (x) Micropipettes for spore picking. (xi) Centrifuge (b) Procedure Mix 100 gram Mycorrhizal biofertiliser in a substantial volume of water and decant through a series of sieves arranged in descending order of mesh size. Roots and coarse debris are collected on coarse sieves (1mm and 450 micron), while spores are captured on one or more finer sieves. Vigorous washing with water is necessary to free spores from aggregates of clay carrier material or organic materials. Collect the sieving in jars. Transfer the sieving on to the gridded Petri dishes/plate and observe under stereomicroscope. Count the number of spores in plate/dish and express it as spores/gram of the sample. (B) By Sucrose gradient centrifugation (optional) (i) Collect the sieving by the method described above. Transfer the sieving into centrifuge tubes and centrifuge for 5 minutes at 1,750 rpm in a horizontal rotor. (ii) Decant the supernatant liquid carefully and resuspend pellet in 60% sucrose solution. Again centrifuge for 2-5 minutes. (iii) Pour the supernatant (with spores) onto a 45 micron sieve and rinse with water to remove the sugar. Transfer the sieving onto the gridded Petri dishes/ plate and observe under stereomicroscope. Count the number of spores in plate/ dish and express it as spores/gram of the sample. 3.2 Spore staining (a) Equipment and Reagent (1) Equipment and reagents for spore extraction as described previously (2) 2,5-diphenyl-2N-tetrazolium bromide (MTT) (3) Distilled water (4) Eppendorf tubes (5) Stereomicroscope (6) Petri dishes (b) Procedure (i) Prepare 0.25% solution of MTT (2,5-diphenyl-2N-tetrazolium bromide) (ii) Avoid exposure of MTT solution to light, as the stain is light sensitive (iii) Add freshly collect AMF spores (approximately 50 in number) collected by any of the two methods described above to the staining solution and incubate at 270 C in sterile Eppendorf tubes in dark (iv) Observe the spores for different colour reactions using stereomicroscope under dark field after 24 hours, 48 hours and 72 hours of incubation. (v) Spores, which stained red or pink, are treated as viable, as per the following formula: Number of spores which stained red or pink % Spore viability = x 100 Total number of spores 4. 1 Assessment of Inoculum Potential16 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] (a) Materials needed: i. Disposable paper/ plastic cups (250 ml) or PVC tubes (15 cm long; 3.2 cm dia.) ii. Plastic bags (30 cm x 20 cm) iii. Sterilized diluents (sand: soil mix 1:1) iv. Onion or Finger millet (ragi) seeds (b) Procedure: (i) Weigh 30 gram of sample in a plastic bag and add to it 270 gram of sterilized diluents (sand: soil mix 1:1). Shake thoroughly to get 10-1 dilution. (ii) Remove 30 gram from the 10-1 dilution and place it into another bag containing 270 g of sterilized diluents. Shake thoroughly to get 10-2 dilution. Make a tenfold series dilution up to 10-4 dilution. (or higher dilution if needed). (iii) Distribute substrate from each dilution into paper/ plastic cups or PVC tubes. Use five replicate cups/ tubes per dilution. (iv) Sow seeds of onion/ Finger millet into each cup. (v) After emergence, thin down to only one plant per tube/cup and let plants grow in a green house or growth room for 45 days (in paper/ plastic cups) or 25 days (in PVC tubes). (vi) At harvest, wash roots free from substrate and stain them with Trypan blue (see the staining procedure given below. (vii) Under a dissecting microscope, determine presence or absence of mycorrhizal colonization in each replicate. Counts of positive tube (those containing mycorrhizae) in different dilutions are used to calculate MPN values. (viii) Use MPN tables of Cochran (1950) given at 1C, 5.3.3 Table 1 under Method of Analysis of Azospirillum Biofertilizers. Note: Using PVC tubes is advantageous as it gives the result in 25 days with less substrate. 4.2 Methodology and explanation for estimating MPN: (i) To exemplify the calculation, let‘s consider that in the 5 replicates (tubes) in each of the four dilutions (10-1, 10-2, 10-3 and 10-4), one obtains a combination of number of positive tubes like: 5,5,3,2; (ii) This means that all 5 replicate tubes are positive for mycorrhizal colonization at 10-1 and 10-2 dilution, 3 replicate tubes are positive at 10-3 dilution and 2 replicate tubes are positive at 10-4 dilution. For the calculation of MPN, only last three dilutions of a given combination are required; (iii) The first number (P1) corresponds to the least dilution in which all (or the highest number of) tubes are positive for mycorrhizal colonization. The two other numbers (P2 and P3) are those corresponding to the next two dilutions. In the example above, the combination would be: P1=5, P2=3 and P3=2; (iv) Now find the row of numbers in MPN Table in which P1 and P2 correspond to the numbers observed experimentally. Follow that row of numbers across the table to the column headed by the observed vale of P3. The figure at the point of intersection is the most probable number of organisms in the quantity of original sample represented in the finished product sample. Calculate total IP/gm as follows:- Value from MPN Table x Dilution level of P2 Total IP/gm = Dry mass of product sample taken [Example - Using the MPN table, the value given for this combination of positive values is 1.4. To obtain the MPN of infective propagules of Arbusicular Mycrrohizal Fungus (AMF) in the sample, this value has to be multiplied by the middle dilution(in this case 10-3). Therefore, the soil has 1.4X 103 infective propagules/g sample (1.4 X 103 IP/g or say 1400 IP/g)].[भाग II—खण् ड 3(ii)] भारत का रािपत्र : ऄसाधारण 17 4.3. Staining roots to observe Mycorrhizal colonization Colonization of root cortex cells by Arbusicular Mycrrohizal Fungus does not alter root morphology. Therefore, to detect and measure mycorrhizal colonization, roots are subjected to a clearing and staining procedure. (a) Materials needed: (i) 10% KOH solution (Potassium Hydroxide) (ii) 1% HCl solution (Hydrochloric acid) (iii) Lacto Glycerol solution (20 ml Lactic acid, 40 ml Glycerol, 40 ml distilled water) (iv) 0.05% Trypan Blue in Lacto Glycerol solution (0.5g/L) (b) Procedure: 1. Wash roots free from soil debris and rinse in several changes of tap water. 2. Soak roots in 10% KOH at 900C for 1 hour or at 1200C for 15 minutes. 3. Remove KOH and rinse roots with water (2-3 times) to remove KOH 4. Soak roots in 1% HCl solution for 5 minutes. 5. Remove HCl. Do not rinse roots after this step as they must be acidified for proper staining. 6. Stain roots in acidic glycerol solution containing Trypan blue at 900C for 1 hour or at 1200C for 5 minutes. 7. Discard stain and keep roots in lacto glycerol till observation. 8. Cut the root into about 1 cm pieces and mount in microscopic slides with Lactoglycerol, place cover slip and observe under the microscope for mycorrhizal colonization. (iv). in schedule IV,- (a) in Part A,- (A) in paragraph 1‖ City compost‖,- I. in item (v), for the symbol and figure < ―1.0‖, the symbol and figure ― < 1.20‖, shall be substituted; II. in item (xi), for the figures ― 6.5- 7.5‖, the figures ―6.0 -8.0‖ shall be substituted; III. in item (xii), for the figure ―4.0‖, the figure ―6.0‖, shall be substituted; (B) in paragraph 3,- I. in item (iv) , for the figure ―7.9‖, the figure ―10.0‖, shall be substituted; II. in item (vi) , for the figure ―10.4‖, the figure ―8.0‖, shall be substituted; III. in item (ix) , for the figure ―8.2‖, the figure ―10.0‖, shall be substituted; (C) in paragraph 4, in item (xi), for the figure ―4.0‖, the figure ―5.0‖, shall be substituted. (b) for Part B and the entries relating thereto, the following Part and entries shall be substituted, namely:— “Part B TOLERENCE LIMIT OF ORGANIC FERTILIZERS A sum total of Nitrogen, Phosphorus and Potassium nutrients shall not be less than 1 per cent. in case of City Compost, 2.5 % in case of Vermicompost, 2.8% in case of organic manure. In case of PROM the Phosphate content in terms of P2O5 content shall not be less than 7.8%.‖ (c) In Schedule IV, in Part D ―METHODS OF ANALYSIS OF ORGANIC FERTILIZERS‖, in serial 3. ―Estimation of Bulk Density‖, for paragraph with heading ‗Calculation‘, the following paragraph shall be substituted, namely:— ―Calculation:18 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] Weight of sample (W2-W1) Bulk Density = Volume (V2) Where W1 = Weight of 100 ml dry cylinder W2 = Weight of the cylinder along with the sample upto 100 ml mark V1 = Volume of sample in cylinder before compacting (up to 100 ml mark) V2 = Volume of sample in cylinder after compacting.‖; (V). in Form ‗J‘,- (a) in serial number (3), after entry (iv) , the following entry shall be inserted namely:— ―(v) the date of expiry of the batch product‖; (b) in serial number 13, for the words ―Name and Address‖, the words ―Name, Address and e-mail ID‖ shall be inserted. [F.No.2-5/2020 Fert.Law] NEERAJA ADDIDAM, Jt. Secy. Note: The principal order was published in the Gazette of India vide GSR number 758(E), dated the 25th September, 1985 and was last amended vide. number S.O 2333 (E) dated 14th June, 2021 Uploaded by Dte. of Printing at Government of India Press, Ring Road, Mayapuri, New Delhi-110064 and Published by the Controller of Publications, Delhi-110054.